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无尘室沉降菌测试标准操作规程
无尘室沉降菌测试标准操作规程
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1、菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU。通常用个数表示。

2、测试方法:沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经48小时以上培养,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定无尘室的洁净度。

3、所用的仪器和设备

1)高压消毒锅:使用时参照文件GZ-ZL-SOP-066-00进行操作。

2)恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

3)培养皿:一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。

4、培养基:普通营养琼脂培养基。将培养基加热熔化,冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿,每皿约15m1。待琼脂培养基凝固后,将培养基平皿放入30~35℃恒温培养箱中培养数小时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可供采样用,制备好的培养基平皿应在2~8℃的环境中存放。

5、测试步骤

1)采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖上盖后倒置。
2)培养,时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可每批选定3只培养皿作对照培养。

3)菌落计数:用肉眼直接计数,然后用5~10倍放大镜检查,有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

6、注意事项

1)测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。

2)采取一切措施防止人为对样本的污染。

3)对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4)由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。

5)采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。

7、测试规则

1)测试状态

(1)沉降菌测试前:被测试无尘室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、必须控制在规定值内。被测试无尘室(区)已消毒。

(2)测试状态有静态和动态两种,并在报告中注明测试状态。

(3)测试人员:测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。

2)测试时间

(1)对单向流,如100级净化房间内及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

(2)对非单向流,如10000级、100000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。

8沉降菌计数
1)最少采样点数目:可按表1确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2。

表1 最少采样点数目


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